Producten
Identificatie van eiwit-eiwit-interactienetwerken in cellen
Eiwit-eiwitinteracties (PPI's) vormen een onmisbaar kerncomponent van cellulaire levensactiviteiten, omvatten meerdere temporele en ruimtelijke dimensies en beïnvloeden diepgaande cruciale cellulaire processen zoals celcyclusregulatie, eiwitsynthese en -secretie, signaaltransductie en metabolisme. Daarom speelt een diepgaand onderzoek naar eiwitinteracties een cruciale rol bij het blootleggen van de mysteries van moleculaire regulerende netwerken.
Momenteel omvatten veelgebruikte technieken voor het bestuderen van eiwitinteracties co-immunoprecipitatie, pull-down assays, eiwitmicroarrays en andere. Deze methoden worden echter geconfronteerd met talrijke uitdagingen in praktische toepassingen, zoals overmatige afhankelijkheid van antilichamen en moeilijkheden bij het effectief vastleggen van voorbijgaande of zwakke interacties. Proximity labeling-technologie is ontstaan om deze uitdagingen aan te pakken, waarbij enzymen doeleiwitten in de directe nabijheid biotinyleren, gevolgd door affiniteitszuivering en massaspectrometriekarakterisering van PPI's. Hiervan worden nabijheidslabelingsmethoden gebaseerd op ascorbaatperoxidase (APEX) en biotineligase het meest gebruikt voor PPI-identificatie. TurboID, een nieuw technologieplatform ontwikkeld op basis van nabijheidsafhankelijke biotine-identificatie (BioID), maakt gebruik van een gemuteerde vorm van E. coli biotineligase. Het op massaspectrometrie gebaseerde technologieplatform voor nabijheidslabeling van CoLinkBio omvat verschillende technieken, waaronder BioID, APEX, TurboID en andere. Deze technieken demonstreren een uitstekende toepasbaarheid in levende celsystemen, met name bij het vastleggen van voorbijgaande of dynamische eiwitinteractiegebeurtenissen, evenals interacties waarbij eiwitten met een lage overvloed of hydrofobe membraaneiwitten betrokken zijn.
Technisch platform
Als we het TurboID-technologieplatform als voorbeeld nemen, fuseert dit platform een gemuteerde biotineligase met de C-terminus van het doeleiwit. In cellen die tot overexpressie komen, maakt de toevoeging van een biotinestimulus een snelle biotinylatie van interacterende eiwitten van het doeleiwit binnen 10 minuten mogelijk. Dit etiketteringsproces is niet alleen snel en vergt weinig achtergrondinformatie, maar kan ook probleemloos worden uitgevoerd, zelfs bij kamertemperatuur. Bijgevolg breidt het TurboID-technologieplatform de toepasbaarheid ervan aanzienlijk uit, omdat het niet alleen geschikt is voor celsystemen van zoogdieren, maar ook voor verschillende biologische systemen zoals planten en insecten. Door vervolgens met biotine gelabelde eiwitten te isoleren en te verrijken, gevolgd door enzymatische vertering, kunnen peptidemonsters eenvoudig worden verkregen voor massaspectrometrieanalyse, waardoor diepgaand onderzoek naar eiwitinteracties en hun functies mogelijk wordt.
Onze voordelen
1. Professionele uitmuntendheid: ons team beschikt over uitgebreide ervaring en publicaties in toptijdschriften en biedt toonaangevende technische diensten.
2. Efficiënte oplossingen: we gebruiken betrouwbare methoden om projecten snel vooruit te helpen en zorgeloze oplossingen te bieden.
3. Rigoureus kwaliteitsmanagement: ons volwassen kwaliteitsmanagementsysteem voldoet aan de ISO 9001-normen en garandeert de authenticiteit en betrouwbaarheid van onze rapporten.
4. Systematisch projectbeheer: van advies tot het opleveren van rapporten, wij zorgen voor tijdige voortgangsupdates, waardoor klanttevredenheid en efficiënte projectuitvoering worden gegarandeerd.
5. Geavanceerde apparatuur: Uitgerust met geavanceerde massaspectrometers zoals de Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 en Bruker timsTOF faciliteren we baanbrekend onderzoek.
Onze service
| Project | Identificatie van eiwit-eiwit-interactienetwerken in cellen |
| Steekproef | Cellysaat, levende cellen |
| Hardwareplatform | Contactloze ultrasone celvergruizer, ChemiDoc MP Imaging System, Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 massaspectrometer |
| Projectduur | 4-6 weken |
| Leveringen | Projectrapport (inclusief experimentele procedures, data-analysegrafieken, bio-informatica-analyseresultaten) |
| Prijs | Klik om te raadplegen |
Casestudy
Projectdoel:Analyseer veranderingen in het eiwitinteractoom van het doeleiwit (POI) in cellen voor en na medicamenteuze behandeling.
Oplossing:Gebruik een strategie voor nabijheidslabeling door een POI-TurboID-expressievector te construeren, deze in cellen tot overexpressie te brengen en met medicijnen behandelde en controlegroepen op te zetten voor biotinylatie. Verrijk het eiwitinteractoom in cellen, gevolgd door kwalitatieve en kwantitatieve analyse van verschillen in gebiotinyleerde eiwitten om veranderingen in het POI-interactoom te karakteriseren.
Datavisualisatie:
