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Identification des réseaux d'interaction protéine-protéine dans les cellules

Les interactions protéine-protéine (IPP) constituent un élément essentiel indispensable des activités de la vie cellulaire, couvrant plusieurs dimensions temporelles et spatiales et influençant profondément des processus cellulaires cruciaux tels que la régulation du cycle cellulaire, la synthèse et la sécrétion de protéines, la transduction du signal et le métabolisme. Par conséquent, une enquête approfondie sur les interactions protéiques joue un rôle central dans la découverte des mystères des réseaux de régulation moléculaire.

Actuellement, les techniques couramment utilisées pour étudier les interactions protéiques comprennent la co-immunoprécipitation, les tests pull-down, les microréseaux de protéines et autres. Cependant, ces méthodes sont confrontées à de nombreux défis dans les applications pratiques, telles qu’une dépendance excessive aux anticorps et des difficultés à capturer efficacement les interactions transitoires ou faibles. La technologie de marquage de proximité a émergé pour relever ces défis, grâce à laquelle les enzymes biotinylent les protéines cibles à proximité immédiate, suivies d'une purification par affinité et d'une caractérisation par spectrométrie de masse des IPP. Parmi celles-ci, les méthodes de marquage de proximité basées sur l'ascorbate peroxydase (APEX) et la biotine ligase sont les plus largement utilisées pour l'identification des IPP. TurboID, une nouvelle plate-forme technologique développée sur la base de l'identification de la biotine dépendante de la proximité (BioID), utilise une forme mutée de biotine ligase d'E. coli. La plateforme technologique d'étiquetage de proximité basée sur la spectrométrie de masse de CoLinkBio englobe diverses techniques, notamment BioID, APEX, TurboID et autres. Ces techniques démontrent une applicabilité exceptionnelle dans les systèmes de cellules vivantes, en particulier pour capturer des événements d'interaction protéique transitoires ou dynamiques, ainsi que des interactions impliquant des protéines en faible abondance ou des protéines membranaires hydrophobes.

Plateforme technique

En prenant comme exemple la plateforme technologique TurboID, cette plateforme fusionne une biotine ligase mutée à l’extrémité C-terminale de la protéine cible. Dans les cellules surexprimantes, l’ajout d’un stimulus biotine permet une biotinylation rapide des protéines en interaction de la protéine cible en 10 minutes. Ce processus d'étiquetage est non seulement rapide et sans bruit de fond, mais peut également être réalisé en douceur, même à température ambiante. Par conséquent, la plate-forme technologique TurboID étend considérablement son applicabilité, étant adaptée non seulement aux systèmes cellulaires de mammifères mais également à divers systèmes biologiques tels que les plantes et les insectes. Par la suite, en isolant et en enrichissant les protéines marquées à la biotine, suivi d'une digestion enzymatique, des échantillons de peptides peuvent être facilement obtenus pour une analyse par spectrométrie de masse, permettant ainsi une étude approfondie des interactions protéiques et de leurs fonctions.

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Nos avantages

1. Excellence professionnelle : Notre équipe possède une vaste expérience et des publications dans les meilleures revues, offrant des services techniques de pointe.
2. Solutions efficaces : nous utilisons des méthodes fiables pour faire avancer les projets rapidement, en fournissant des solutions sans souci.
3. Gestion rigoureuse de la qualité : Adhérant aux normes ISO 9001, notre système de gestion de la qualité mature garantit l'authenticité et la fiabilité de nos rapports.
4. Gestion de projet systématique : de la consultation à la livraison du rapport, nous fournissons des mises à jour en temps opportun, garantissant la satisfaction du client et une exécution efficace du projet.
5. Équipement de pointe : Équipés de spectromètres de masse avancés comme le Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480 et le Bruker timsTOF, nous facilitons des recherches révolutionnaires.

Notre service

Projet Identification des réseaux d'interaction protéine-protéine dans les cellules
Échantillon Lysat cellulaire, cellules vivantes
Plateforme matérielle Pulvérisateur de cellules ultrasoniques sans contact, système d'imagerie ChemiDoc MP, spectromètre de masse Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2
Durée du projet 4-6 semaines
Livrables Rapport de projet (y compris les procédures expérimentales, les graphiques d'analyse des données, les résultats de l'analyse bioinformatique)
Prix Cliquez pour consulter

Étude de cas

Objectif du projet :Analyser les changements dans l'interactome protéique de la protéine cible (POI) dans les cellules avant et après le traitement médicamenteux.
Solution:Utilisez une stratégie de marquage de proximité en construisant un vecteur d’expression POI-TurboID, en le surexprimant dans les cellules et en mettant en place des groupes traités par médicament et des groupes témoins pour la biotinylation. Enrichir l’interactome protéique dans les cellules, suivi d’une analyse qualitative et quantitative des différences dans les protéines biotinylées pour caractériser les changements dans l’interactome POI.
Visualisation des données :

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